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液相色谱法测定茶叶中Aflatoxin B1
  • 发布日期:2018-06-28      浏览次数:797
    •    1.适用范围

        本方法适用于出口茶叶中Aflatoxin B1含量的检验。

        2.原理概要

        样品用CHCl3提取,提取液经硅胶柱净化,净化后的提取液用三C2HF3O2衍生,用配有荧光检测器的液相色谱仪测定,外标法定量。

        3.主要试剂和仪器

        3.1.主要试剂:CHCl3、正己烷、苯、甲醇:紫外光谱级、乙腈:紫外光谱级、三C2HF3O2、乙腈-水溶液(1+1)、CHCl3-甲醇溶液(95+5)、苯-乙腈溶液(98+2)、Aflatoxin B1标准品:纯度≥99%、Aflatoxin B1标准溶液:准确称取适量的Aflatoxin B1标准品,以苯-乙腈溶液于棕色容量瓶中,配成浓度为10μg/mL标准贮备液。根据需要,再配成适当浓度的标准工作溶液。

        3.2.仪器

        液相色谱仪,配有荧光检测器;

        硅胶小柱:Sep-pak Silica前处理小柱或相当的硅胶前处理小柱;

        振荡器;

        旋转蒸发器,配有100mL具尾管的圆底烧瓶;

        微量注射器;

        离心管:5mL具塞磨口;

        粉碎机;

        滤膜:有机系用,0.45μm;

        微孔滤膜过滤器:有机系用,0.5μm。

        4.试样的抽取与制备

        4.1.检验批

        以不超过2000件为一检验批。

        同一检验批的商品应具有相同的特征,如包装、标记、产地、规格、等级等。

        4.2.抽样数量

        批量,件 低抽样数,件

        1~5 1

        6~50 2

        51~500 11

        501~1000 16

        1001~1500 19

        1501~2000 20

        4.3.抽样方法

        从整批产品堆垛的上下不同部位随机抽取2.2规定的件数,逐件开启。分别倒出全部茶叶于塑料布上,用取样铲从每件中各取出有代表性的样品约500g。将所取样品充分混匀,用四分法或分样器逐步缩分出500g,装入洁净密封的样品筒内,加封后,标明标记,及时送实验室。

        4.4.试样制备

        将所取回样品全部磨碎,通过20目筛,混匀,均分成两份试样,装入洁净容器内,密封,标明标记。

        4.5.试样保存

        将试样于室温下保存。

        注:在抽样和制样的操作过程中,必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

        5.过程简述

        5.1.提取

        称取试样5.0g(到0.1g)置于100mL具塞锥形烧瓶中,加入15mLCHCl3,于振荡器上提取30min,然后经垫有玻璃纤维的漏斗过滤。收集滤液于旋转蒸发器的具尾管圆底烧瓶内,并用CHCl3洗涤滤渣,收集滤液至约20mL。

        5.2.净化

        用旋转蒸发器将上述滤液在50℃水浴中浓缩至约1mL,经0.45μm滤膜过滤后,注入硅胶小柱中。用2~4mL正己烷洗涤烧瓶后淋洗小柱,弃去流出液。然后用3~4mLCHCl3-甲醇溶液以每秒钟2滴的流速洗脱,收集洗脱液于离心管中。用氮气缓缓吹干,供衍生用。

        5.3.衍生

        5.3.1.试样

        加200μL正己烷和50μL三C2HF3O2于上述离心管中,盖紧磨口塞,超声振荡1min,静置10min,打开磨口塞,缓缓通入氮气至干。用乙腈-水溶液(1+1)定容至1.0mL,超声1min,用0.5μm滤膜过滤,滤液供液相色谱用。

        5.3.2.标准工作溶液

        取1.0mL标准工作溶液,用氮气缓缓吹干,按5.3.1步骤操作。

        5.4.测定

        5.4.1.色谱条件

        色谱柱:NOVA PAKc18,300mm×3.9mm(内径);

        流动相:甲醇-水溶液(42+58);

        流速:0.8mL/min;

        荧光检测器:激发波长375 nm,发射波长425 nm;

        色谱柱温度:室温。

        5.4.2.测定

        根据样液中Aflatoxin B1的含量情况,选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中Aflatoxin B1衍生物的响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液的衍生物溶液等体积参**样测定。在上述色谱条件下,Aflatoxin B1衍生物保留时间约为8min。

        5.4.3.空白试验

        除不加试样外,按上述测定步骤进行。

        6.结果计算

        用色谱数据处理机或按下式计算试样中Aflatoxin B1的含量:

        X= A·cs

        As·c

        式中:X -- 试样中Aflatoxin B1的含量,mg/kg;

        A -- 样液中Aflatoxin B1衍生物的峰面积,mm2;

        cs -- 标准工作溶液中AflatoxinB1的浓度,μg/mL;

        As -- 标准工作溶液中AflatoxinB1衍生物的峰面积,mm2;

        c -- 终样液所代表试样的浓度,g/mL。

        注:计算结果需扣除空白值。

        7.低限和回收率测定

        7.1.低限

        本方法的测定低限为0.001mg/kg。

        7.2.回收率

        回收率的实验数据:Aflatoxin B1的添加浓度在0.001~0.5mg/kg范围内,回收率为89.1%~104.9%。

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      86-010-82382578

    • 传真

      86-010-82382580

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