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液相色谱柱常见问题分析
  • 发布日期:2018-01-24      浏览次数:679
    •     液相色谱仪的液相色谱柱在使用一段时间后,会出现一定的常见故障,如果不能很好的判断并解决就会影响色谱柱的使用效果,从而影响样品的分析结果。

        液相色谱柱常见的几种故障判断及排除方法:

        1.柱压问题柱压问题是使用液相色谱过程中需要密切注意的地方,柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。

        1.1压力过高:

        这是液相在使用中zui常见的问题,指的是压力突然升高,一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时,我们应该分段进行检查。

        (1)首先断开真空泵的入口处,此时,PEEK管里充满液体,使PEEK管低于溶剂瓶,看液体是否自由滴下,如果,液体不滴或缓慢滴下,则是溶剂过滤头堵塞。

        处理方法:

        用30%的硝酸浸泡半个小时,在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下,溶剂过滤头正常,再检查;

        (2)打开Purge阀,使流动相不经过柱子,如果压力没有明显下降,则是过滤白头堵塞。

        处理方法:

        将过滤白头取出,用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100PSI(6.7Bar)以下,过滤白头正常,再检查;

        (3)把色谱柱出口端取下,如果压力不下降,则是柱子堵塞。

        处理方法:

        如果是缓冲盐堵塞,则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞,则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。

        假如,按上面的方法长时间冲洗压力都不下降,则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上,用流动相冲洗柱子。这时,如果柱压仍不下降,只有换柱子入口筛板,但是,一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以,尽量少用。

        1.2压力过低

        压力过低的现象一般是由于系统泄漏

        处理方法:

        寻找各个接口处,特别是色谱柱两端的接口,把泄漏的地方旋紧即可。当然,还有一个原因就是泵里进了空气,但此时表现的往往是压力不稳,忽高忽低,更严重一点会导致泵无法吸上液体。

        处理方法:

        打开Purge阀,用3~5mL/min的流速冲洗,如果不行,则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。

        2.漂移问题 主要包括基线漂移和保留时间漂移。

        2.1基线漂移

        一般说来,机器刚起动时,基线容易漂移,大概要半个小时的平衡时间,如果,你用了缓冲溶液或缓冲盐,还有就是在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长,但是,如果你在实验过程中发现基线漂移,则你要考虑下面的原因:

        ①紫外灯能量不足。

        解决方法:

        更换新的紫外灯;

        ②柱温波动。

        解决方法:

        控制好柱子和流动相的温度,检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。

        ③流通池被污染或有气体。

        解决方法:

        用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(断开柱子)。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。

        ④流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。

        解决方法:

        检查流动相的组成,使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。

        ⑤样品中有强保留的物质(高K'值)以馒头峰样被洗脱出,从而,表现出一个逐步升高的基线。

        解决方法:

        使用保护柱,如有必要,在进样之间。在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。

        ⑥检测器没有设定在zui大吸收波长处。

        解决方法:

        将波长调整至zui大吸收波长处;

        ⑦流动相的pH值没有调节好。

        解决方法:

        加适量的酸或碱调至zui佳pH值;

        2.2保留时间漂移

        保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志,同一种东西,两次的保留时间相差不要超过15s,超过了半分钟可看做保留时间漂移,就无法进行定性,你要考虑以下原因:

        ①温控不当。

        解决方法:

        调好柱温,检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。

        ②流动相比例变化。

        解决方法:

        检查四元泵的比例阀是否有故障。

        ③色谱柱没有平衡。

        解决方法:

        在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。

        ④流速变化。

        解决方法:

        重新设定流速。

        ⑤泵中有气泡。

        解决方法:

        从泵中除去气泡。

        2.3峰型异常问题

        峰型问题是液相的主要问题,在做液相过程中,我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型,对于各种各样的异常峰,要区别对待,从主要问题出发,一个一个加以解决。

        ①所有峰均为宽峰。

        解决方法:

        系统未达到平衡;

        溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;

        色谱柱尺寸及类型选择不正确;

        色谱柱或保护柱被污染或柱效降低;

        温度变化造成的影响。

        ②所出峰比预想的小。

        解决方法:

        样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确,定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。

        ③色谱图中未出峰。

        解决方法:

        系统未进样或样品分解;

        泵未输液或流动相使用不正确;

        检测器设置不正确;

        针对以上情况成因作相应调整即可。。。

        ④一个峰或几个峰是负峰。

        解决方法:

        流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相。

        ⑤所有峰均为负峰。

        解决方法:

        信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;

        光学装置尚未达到平衡。

        6.出现双峰或肩峰。

        解决方法:

        进样量过大;样品浓度过高;

        保护柱或色谱柱柱头堵塞;

        保护拄或色谱柱污染或失效;

        柱塌陷或形成短通道。

        7.前伸峰。

        解决方法:

        进样量或样品浓度高;

        溶解样品的溶剂较流动。

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